Вид: Protodrilus flavocapitatus (Uljanin, 1877)    Annelida

Тип препарата: тотальный препарат

Изготовил: А.А. Петров

Описание препарата: Нервная система и мускулатура полихеты Protodrilus flavocapitatus (Polychaeta, Annelida). Нервная система окрашена антителами к ацетилированному альфа-тубулину и FMRF-амиду. Препарат включает участок тела, соответствующий четырем сегментам. На препарате видны брюшная нервная цепочка с отходящими от нее нервами, мускулатура стенки тела и щетинок и реснички в каналах протонефридиев.

Окраска: FMRF-амид, актин в мышечных волокнах (фаллоидин), ацетилированный альфа-тубулин

Подробности метода: Червей фиксировали в течение 6 часов 4% формальдегидом на 0.01M PBS и хранили при 6°С в 0.1% растворе азида натрия на 0.01М PBS. Все последующие операции проводили при комнатной температуре. Перед окраской животных выдерживали 2 часа в 0.5% Triton X-100 на 0.01M PBS и затем 1 час в блокирующем буфере Image-iT® FX Signal Enhancer (кат. номер I36933; Molecular Probes). После этого червей промывали 3 раза по 15 минут в 0.5% Triton X-100 на 0.01M PBS, инкубировали в течение 12 часов в смеси (1:1) мышиных антител к ацетилированному альфа-тубулину (разведение 1:250, кат. номер T7451; Sigma-Aldrich) и кроличьих антител к FMRF-амиду (разведение 1:250, кат. номер ab10352; Abcam), промывали 4 раза по 15 минут в 0.5% Triton X-100 на 0.01M PBS и затем инкубировали 5 часов в смеси (1:1) антител к IgG мыши (разведение 1: 300, Alexa Fluor 633; кат. номер 1A-21052; Thermo Fisher Scientific) и антител к IgG кролика (разведение 1: 300, Chromeo 488, кат. номер ab60314; Abcam). После окраски антителами червей промывали 15 минут в 0.5% Triton X-100 на 0.01M PBS, окрашивали в течение 2 часов фаллоидином-TRITC (разведение 1:150, Sigma-Aldrich, кат. номер P1951; Sigma-Aldrich), затем промывали 15 минут в 0.01M PBS и заключали в 80% глицерин на 0.01M PBS.

Место хранения препарата: Зоологический институт РАН

Описание: Серия изображений, полученных с участка тела полихеты Protodrilus flavocapitatus (Polychaeta, Annelida), показывающая мышцы стенки тела и щетинок, а также нервную систему, окрашенную антителами к ацетилированному альфа-тубулину и FMRF-амиду. Хорошо видны два ствола брюшной нервной цепочки, соединяющие их поперечные и диагональные комиссуры и отходящие от них боковые нервы. Кроме того, на изображениях серии видны реснички в каналах протонефридиев.

Органы: центральная нервная система, нервный ствол, ганглий / ганглии, коннектива, коммиссура, нерв, нервная клетка/клетки, иннервация мускулатуры / мускулатура, периферическая нервная система

Методы: Иммуногистохимия - ацетилированный альфа-тубулин,
Иммуногистохимия - FMRF-амид,
Гистохимия - актин в мышечных волокнах (фаллоидин)